支原体又称霉形体,是一类无细胞壁的细菌,整个细胞菌体柔软,呈现高度多形性,可通过细菌滤器。支原体能在无细胞的人工培养基中生长繁殖,含有DNA和RNA,以二分分裂或芽生方式繁殖;广泛分布于污水、土壤、植物、动物和人体中,营以腐生、共生或寄生,常污染实验室的细胞培养及生物制品。目前认为有30多种对人或畜禽有致病特性。霉形体在分类上属柔膜体纲,其中霉形体属及脲原体属是兽医学的主要研究对象。禽的霉形体有多种,如禽败血霉形体、滑液霉形体、火鸡霉形体、鸡霉形体、鸭霉形体、鸽霉形体、鸽口霉形体等等。对禽具有明显致病性的霉形体主要是禽败血霉形体、滑液霉形体和火鸡霉形体三种。
一、禽败血霉形体的生物学特性
禽败血霉形体又名鸡毒霉形体、鸡败血支原体等。是引起鸡和火鸡等多种禽类慢性呼吸道病或火鸡传染性窦炎的病原,从鸡、火鸡、雉鸡、珍珠鸡、鹌鹑、野鸡、鹧鸪、鸭、鸽、矮脚鸡、孔雀、麻雀等10多种禽类均可分离到本菌。
(一)形态 菌体通常为球形(直径0.2-0.5um)、卵圆形或梨形,细胞的一端或二端具有“小泡”极体,该结构与菌体的吸附性有关。以姬姆萨或瑞氏染料着色良好,革兰氏染色为弱阴性。
(二)培养及生化特性 需氧和兼性厌氧,对营养要求较高,在含马血清或灭活鸡、猪血清的培养基中生长良好,一般常用牛心浸出液培养基,用前加入10%-20%马血清,为了抑制杂菌的生长需加入醋酸铊(1:4000倍)和青霉素1000U/ml,调PH7.8-8.0。在液体培养基中加酚红为指示剂,固体培养基中加1.0%-1.5%琼脂。
在液体培养基中,37℃经2-5d的培养物可呈现轻度浑浊乃至均等浑浊,在固体培养基上经3-10d,可形成圆形表面光滑透明、边缘整齐、露滴样小菌落,直径约0.2-0.3m,菌落中央有颜色较深且致密的乳头状突起。
生长于固体培养基上的菌落,在37℃可吸附鸡的红细胞、气管上皮细胞、HeLa细胞等,此吸附作用可被相应的抗血清所抑制,吸附的受体可被神经氨酸酶所破坏。
在5-7d龄鸡胚卵黄囊内繁殖良好,并可使鸡胚在接种后5-7d内死亡,病变表现为胚体发育不良,水肿、肝肿大、坏死等,死胚的卵黄及绒毛尿膜中含本菌量最高。
(三)致病特性 本菌主要感染鸡和火鸡,引起慢性呼吸道病(CRD)。亦可感染珍珠鸡、鸽、鹧鸪、鹌鹑及野鸡等。病原体存在于病鸡和带菌鸡的呼吸道、卵巢、输卵管和精液中,带菌鸡胚可垂直传递给后代,公鸡可通过交配将病传遍全群,鸡群一且染病即难以彻底根除。火鸡较鸡易感。雏鸡比成鸡易感,成鸡常无明显临床症状,应激因子及其他呼吸道病原微生物以及鸡新城疫弱毒株的协同作用,使病情恶化、症状明显。大肠杆菌特别是O78、O2、O1株继发感染时,可引起特征性的肝包膜炎、心包炎以及气囊炎。
具有神经毒素,用本菌S6株接种于雏火鸡,可出现脑动脉炎结节,并产生运动失调、麻痹,应激死亡。经火鸡或雏鸡气管、气囊接种,可引起窦炎、气管炎、气囊炎。附关节或脚掌接种则易引起腿鞘炎。
病鸡康复后具有一定的免疫力。血清抗体虽在试管内可抑制本菌的生长,但不能产生被动免疫。弱毒菌苗形成免疫需时长,免疫力不坚强,且接种后一段时间内不能使用抗菌药,易发生其他细菌病,灭活苗效果也不理想。
(四)实验室诊断 无细胞的特殊培养基分离不易成功,鸡胚的分离率也不高,且非病性霉形体繁殖快,故很少采用病原分离和鉴定来诊断CRD,血清学试验可准确,快速诊断。
血清学诊断一般常用的方法有平板凝集试验、试管凝集试验,血细胞集抑制试验等。多采用抽样检查法,一旦检出血液中本菌抗体阳性鸡,即可作为整个鸡群污染的定性指标,判断为阳性鸡群。
病原体分离可取气管、气囊、肺、眶下窦渗出液,活体可从后胸气囊处打一个小孔,以棉拭子擦拭。为了提高分离率可在培养基中加入一定量的鸡血清和鸡肉汤。用在平板上的菌落中进行红细胞吸附试验,取0.25%鸡红细胞液滴于琼脂培养物表面,置15min,倾去红细胞液,用生理盐水轻洗2-3次,低倍镜检查,可见菌落表面有多量红细胞。此种吸附可被相应的抗血清所抑制。
二、火鸡霉形体的生物学特性
是火鸡的一种病原体,经蛋传递,引起孵化率下降、雏火鸡气囊炎、骨畸形。液体培养的菌体呈球状,直径约0.4um,有时单在,双球或成小丛排列。
兼性厌氧,最适生长温度为37-38℃,在含10%-20%马血清和5%酵母渗出物的培养基上生长良好。在琼脂培养上培养2-3d,可形成扁平、中心粗糙的微小菌落,直径20-40um。初代分离时菌落中心的乳头不明显,但实验室继代株呈明显的乳头状。初代分离时用固体培养,在液体培养基中很难生长。
在含2%马红细胞的火鸡肉汤琼脂上,能溶解马红细胞。不吸附和凝集禽类红细胞。
在空气中可存活6h以上,在PH8.4-8.7的肉汤中可存活25-30d,琼脂培养基上的培养物在室温中可存活最少6d。琼脂上的菌落捣碎加入3%蔗糖溶液,放-20~-70℃可保存2个月以上。琼脂斜面培养物渗以肉汤,放-30℃中可保存2年,冻干物培养物可保存5年以上。对药物的敏感性与禽霉形体相似。
确诊应进行病原分离,可用灭菌棉拭子从泄殖腔取病料,插入含青霉素2000IU/ml、1%醋酸铊50ul/ml及多黏菌素1ul/ml?的肉汤中培养。分离物应作生化鉴定和血清学试验,与禽的其他霉形体区别。血清学试验可用平板凝集试验,试管凝集试验,生长抑制试验或免疫荧光试验。
三、滑液囊霉形体的生物学特性
是引起鸡和火鸡传染性滑液囊炎的病原,并可通过蛋传递,临床主要表现为关节炎。病原多呈球状或球杆状,比禽败血霉形体稍小,直径约0.2-0.4um。营养要求比禽败血霉形体更高,培养需加10%猪血清,在含鸡血清或鸡肉汤的培养基需添加0.01%烟酰胺腺嘌呤核甘酸或烟酰胺方能生长。在琼脂培养基面可形成中,37℃经3-7d可形成“荷包蛋”样菌落,直径0.10-0.30mm,培养至10d以上在培基表面可形成结晶状薄膜。能在5-7日龄的鸡胚中繁殖,能致死鸡胚,并呈现鸡水肿、出血、肝、脾、肾肿大及坏死病变。能在鸡肾和鸡气管细胞上增殖。
在pH6.9以下时不稳定,对39℃以上的温度敏感,在-63℃中可存活7年,-20℃中存活2年,对氯霉素、四环素、链霉素等敏感。
鸡和火鸡是天然宿主。人工接种雉和鹅也可感染,兔、豚鼠、小鼠、猪、羔羊等不染。
实验室诊断可采取急性病鸡的关节渗出液,肝、脾等为材料,以营养肉汤1:10倍稀释,初代分离时最好先接种于鸡胚的卵黄囊内,待鸡胚出现典型病变并收获卵黄囊、尿囊液或羊膜,将其分别种于含10%猪血清的0.01%NAD培养基,如果生长即可作为初步诊断。尚可用落菌压片并进行荧光抗体、酶标抗体检查或生长抑制试验进行鉴定。
四、抵抗力和兽医临床防控
禽败血霉形对理化因素的抵抗力不强。对紫外线敏感,阳光直射便迅速丧失活力。一般常用的化学消毒剂均能迅速将其杀死,加热50℃20min即可灭活。在肉汤培养物中-30℃能存活2-4年,经低温冻干后在-4℃能存活7年,在卵黄中37℃能存活8周,在孵化的鸡胚中45.6℃经12-24h可被灭活。对泰万菌素、泰乐菌素、红霉素、螺旋霉素、放线菌素D、丝裂霉素最为敏感,对四环素、金霉素、土霉素、链霉素、林可霉素次之,但易形成耐药菌株。对青霉素、多黏菌素、卡那霉素、新霉素和磺胺类药物有抵抗力。当前兽医临床的主要治疗和控制措施如下:
方案措施一:5%酒石酸泰万菌素预混剂。混饲,以本品计,每200g拌料100kg,连用7天。
方案措施二:50%盐酸土霉素可溶性粉。混饮,以本品计,每50g兑水100kg,连用3-5天。
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